Александр Александрович Максимов - Василий Николаевич Манских

эмбриональном материале {42}. И большинство исследователей, говоря о технических достижениях Максимова, обсуждают только эту статью. Менее известны три его небольшие работы, посвященные митохондриям. В первой из них указывается на волоски тыквы как на удобный объект для наблюдения этих органелл {54}, во второй и третьей рекомендуется оптимальная, по мнению Максимова, комбинация методов для фиксации и окрашивания хондриосом {58, 60}.

Кроме этих специальных статей представление о технике Максимова – и гораздо более широкое – дают соответствующие разделы его оригинальных гистологических работ, а также работ его учеников. Не надо забывать, что, помимо фиксации, заливки и окраски, к техническим моментам работ Максимова следует отнести методы индукции асептического воспаления, постановки тканевых культур и даже зарисовку препаратов[70]. Далее мы предпримем попытку реконструировать максимовскую технику на основе работ самого Максимова, работ учеников, выполненных под его непосредственным руководством (иногда в них методы изложены полнее), и отчасти книг по микротехнике его и более позднего времени.

А) Фиксация. Ранние казуистические наблюдения А. А. Максимова не имеют почти никаких технических указаний. Но уже его вторая работа – об экспериментальном амилоидозе – отличается богатой и изысканной микротехникой {2}. И все последующие работы Максимова – до его знаменитой статьи о воспалении 1902 г. {22}, включая и докторскую диссертацию, – выполнены в основном в аналогичной технике.

Разумеется, Максимов, с его любовью к высшему качеству, сразу же обратил внимание на осмиевые фиксаторы, которые, конечно же, давали (и дают) наиболее ясные и сохранные картины, хотя и чрезвычайно дороги. В ранних работах, если предполагается окраска так называемой зернистости Альтмана (митохондрий), Максимов применяет фиксатор самого Р. Альтмана (смесь равных частей 5 % бихромата калия и 2 % тетраоксида осмия на дистиллированной воде), но наибольшей популярностью для общей фиксации у него пользуется жидкость Подвысоцкого (с модификацией Максимова – он увеличил вдвое содержание в ней сулемы). Интересно, что рецепт этой жидкости автору настоящей книги не удалось найти ни в одном крупном руководстве по микротехнике. К счастью, он есть в самих работах Максимова по амилоидозу {2, 3}. Из него видно, что фиксатор представляет собой модификацию «крепкой» жидкости Флемминга с прибавлением сулемы (очевидно, чтобы достичь хорошей фиксации не только ядра, но и цитоплазмы):

хромовая кислота, кристаллическая (хромовый ангидрид) -15 мл 2% водного раствора;

сулема – 15 мл 2% водного раствора;

осмиевая кислота (четырехокись осмия) – 8 мл 2% раствора;

ледяная уксусная кислота, неразведенная – 12 мл.

Продолжительность фиксации – 4–5 суток.

Однако Максимов указывает, что даже эта жидкость (как и все осмиевые фиксаторы) плохо проникает в ткань, и потому ею могут быть зафиксированы только маленькие кусочки. Именно поэтому в более поздних работах, с использованием целлоидиновых камер, Максимов был вынужден искать новые фиксирующие средства, так как осмиевые смеси давали здесь очень плохие результаты {22}. Если же ему приходится с общими целями фиксировать крупные объекты (например, яички взрослых животных длиной до 2 см с надсеченной после мягкой фиксации капсулой, тканевые культуры, целлоидиновые камеры и т. д.), то он пользуется ныне почти забытым оригинальным раствором Ценкера (не ценкер-формолом!) {22} [54, 100, 111, 183]:

дистиллированная вода – 100 мл;

сулема – 5 г (растворяется в кипящей воде, по мнению некоторых авторов [52], это избыточное количество, не худший результат дают 3 или даже 1 г);

бихромат калия – 2,5 г;

сульфат натрия – 1 г;

ледяная уксусная кислота – 5 мл (добавляется непосредственно перед фиксацией к заранее приготовленному и сохраняемому сколь угодно долго раствору всех остальных компонентов).

Фиксация в такой смеси обычно продолжалась 48 часов.

Еще один часто использовавшийся Максимовым фиксатор – насыщенный (при кипячении, примерно 5 %) раствор сулемы на физиологическом растворе поваренной соли {13, 22}[100]. Сегодня об этом фиксаторе почти не помнят, а между тем он считался лучшим, когда речь шла об окраске центросом и ахроматинового веретена железным гематоксилином (их вообще затруднительно покрасить без сулемовой фиксации). Очень хорош он и для фиксации муцинов (например, в слюнных железах), поскольку после него метахромазия (окрашивание в цвет, отличный от цвета краски) проявляется особенно ярко.

Для выявления митохондрий и аппарата Гольджи в более поздних работах Максимов предпочитал смесь Шампи (7 мл 3% водного раствора бихромата калия, 7 мл 1% хромовой кислоты, 4 мл 2% четырехокиси осмия, 24 часа, затем ополаскивание в дистиллированной воде и выдержка 24 часа в смеси 1 части древесного уксуса и 2 частей 1 % хромовой кислоты, промывание полчаса в дистиллированной воде и помещение в 3 % бихромат калия на 1 день, 24-часовая промывка в воде) {57–59}.

Для фиксации с гистохимическими целями Максимовым применялись абсолютный этанол на 24 часа (амилоид, чувствительные к воде гранулы тучных клеток и базофильных лейкоцитов) {2, 3, 10, 53} и 4 % формалин (для фиксации жира в тканевых культурах) {57}. Для целлоидиновых камер брался только 96° спирт, так как абсолютный этанол растворял целлоидин самой камеры. Специально для тканевых культур в форме тотальных препаратов он предпочитал жидкость Карнуа (этанола – 6 частей, хлороформа – 3 части, ледяной уксусной кислоты – 1 часть, смесь должна быть свежей, продолжительность фиксации – 10–15 минут) {57}.

Отдельного рассмотрения заслуживают гематологические методы, применявшиеся Максимовым {42}.

Прежде всего, это знаменитый ценкер-формол. Этот фиксатор, вопреки распространенному заблуждению, – он называется также «жидкостью Максимова» – впервые предложен не им, а К. Гелли [162], причем соответствующая ссылка (правда, с опечаткой) в работе Максимова имеется {42}. Состав его тот же, что и у жидкости Ценкера (см. выше), только вместо уксусной кислоты нужно добавить 10 мл (у К. Гелли – 5 мл) неразведенного формалина. Максимов советует вначале нагреть основной раствор до температуры тела, затем прилить формалин и быстро поместить в него еще теплый объект. Через 30 минут раствор следует охладить. Тонкие зародышевые диски Максимов сперва осторожно отпрепаровывает с помощью ножниц и кисточки в подогретом до температуры тела растворе Рингера, а затем насаживает их на выпуклую сторону часовых стекол и каплями наносит фиксирующую жидкость, благодаря чему через несколько секунд диски уплотняются в расправленном, лишенном складок состоянии. Затем, легко побалтывая стеклом в фиксирующей жидкости, диски отделяются от стекла. Продолжительность фиксации для зародышевых дисков – 10–15 минут, тканевых культур – 15–20 минут, для эмбринов до 3 мм – 1 час, для крупных объектов (до 1,5 см, причем следует предварительно рассечь кожные покровы) – 6 часов. Иногда объекты фиксируют 12 и даже 24 часа {42} [100]. Результаты, однако, не улучшаются, если увеличивать продолжительность фиксации – ткани могут терять способность к окраске, цитоплазма гомогенизируется и т. д. При фиксации ценкер-формолом 24 часа и более иногда удается окрасить митохондрии, вероятно, вследствие длительного хромирования материала. Фиксация крупных и плотных